A2780 人卵巢癌細胞

細胞名稱：A2780 人卵巢癌細胞

英文名稱：Human Ovarian Cancer Cells

種屬來源：人

組織來源：卵巢

細胞形態(tài)：上皮細胞樣

生長特性：貼壁生長

培養(yǎng)基：89% RPMI-1640培養(yǎng)基 + 2mM 谷氨酰胺 + 10% FBS + 1%雙抗

生長條件：氣相：95%空氣、5%二氧化碳；溫度：37℃；濕度：70~80%

傳代方法：1:2至1:4，每周 2~3次

凍存條件：細胞凍存液：80%培養(yǎng)基 + 10%血清 + 10%DMSO，梯度降溫，液氮儲存

細胞用途：僅供研究之用

細胞名稱：CHO-K1 中國倉鼠卵巢細胞亞株

英文名稱：Chinese Hamster Ovary Cells

英文名稱：CHO K1，CHOK1，CHO cell clone K1，GM15452

種屬來源：中國倉鼠

組織來源：卵巢

細胞形態(tài)：上皮細胞樣

生長特性：貼壁生長

培養(yǎng)基：89% F12K培養(yǎng)基(SIGMA,貨號N3520，添加NaHCO3 2.5g/L)+ 10% FBS + 1%雙抗

生長條件：氣相：95%空氣、5%二氧化碳；溫度：37℃；濕度：70~80%

傳代方法：1:2至1:3，每周 2~3次

凍存條件：細胞凍存液：80%培養(yǎng)基 + 10%血清 + 10%DMSO，梯度降溫，液氮儲存

細胞用途：僅供研究之用

細胞名稱：SK-OV-3 人卵巢癌細胞

英文名稱：Human Ovarian Cancer Cells

別稱：SKOV-3，SKOV3，Skov3，SKO3

種屬來源：人

組織來源：卵巢腺癌，腹水轉移

細胞形態(tài)：上皮細胞樣

生長特性：貼壁生長

培養(yǎng)基：89% McCoy's 5A培養(yǎng)基 + 10% FBS + 1%雙抗

生長條件：氣相：95%空氣、5%二氧化碳；溫度：37℃；濕度：70~80%

傳代方法：1:2至1:3，每周 2~3次

凍存條件：細胞凍存液：80%培養(yǎng)基 + 10%血清 + 10%DMSO，梯度降溫，液氮儲存

細胞用途：僅供研究之用

細胞培養(yǎng)操作

1）復蘇細胞：將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

注意：a) 該細胞貼壁較慢，建議復蘇、傳代后讓細胞貼壁48-72h后再進行后續(xù)實驗操作。 b) 使用0.25%(w/v) Trypsin-0.53 mM EDTA消化細胞。 c) MCF7是一種生長緩慢的細胞系，它會以松散的三維團簇的形式出現(xiàn)，并伴有一些漂浮的活細胞。懸浮的活細胞可以通過離心后重新加入到培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。在復蘇后前二代該細胞會出現(xiàn)貼壁緩慢的情況，是正?，F(xiàn)象。松散的三維團簇細胞慢慢會擴散形成一個扁平的單層細胞。如果生長速度比正常情況慢，可以嘗試另一批FBS（即血清批次的促生長能力可能不同）。此外，將血清濃度增加到20％也可能有助于改善生長。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

c、按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

d、將細胞懸液按1：2~3比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；

a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，加 1 mL血清重懸細胞，進行細胞計數(shù)。

b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×10⁶~1×10⁷/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

培養(yǎng)注意事項

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

4. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內多余的培養(yǎng)基可收集備用，細胞傳代時可以一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細胞逐漸適應培養(yǎng)條件。

5. 建議客戶收到細胞后，前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

6. 該細胞僅供科研使用。

上海昆盟生物科技有限公司 (Coweldgen Scientific Co.,LTD) 是一家專注于生命科學領域提供相關試劑產品和服務的生物高科技企業(yè)，坐落于上海聚科生物產業(yè)園。公司提供種類齊全的細胞系和多種原代細胞、質量穩(wěn)定的細胞培養(yǎng)試劑產品、成熟高效的技術服務。本著“守正創(chuàng)新，科學嚴謹"的理念，我們以高標準塑造行業(yè)品牌，以全新視野構建現(xiàn)代企業(yè)，勇于探索和創(chuàng)新。公司業(yè)務范圍涉及全國各省市自治區(qū)，與國內多家醫(yī)院、高校、科研院所、生物科技公司建立了良好的合作關系，贏得了良好的市場聲譽和廣泛的認可，我們保證將繼續(xù)為廣大科研用戶提供專業(yè)、高效、優(yōu)質的產品及服務！

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