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細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí),不同區(qū)域內(nèi)(如細(xì)胞膜、細(xì)胞漿、線粒體、細(xì)胞核等)會(huì)發(fā)生不同的生理生化改變。因此,針對(duì)不同區(qū)域的細(xì)胞凋亡檢測(cè)要采用不同的方法。
細(xì)胞傳代培養(yǎng):根據(jù)不同細(xì)胞采取不同的方法。貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞用消化法傳代;部分貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞用直接吹打可傳代;懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞可以采用直接吹打或離心分離后傳代,或用自然沉降法吸除上清后,再吹打傳代。
染色質(zhì)開(kāi)放性是指真核生物染色質(zhì)和組蛋白、轉(zhuǎn)錄因子等是否結(jié)合的開(kāi)放程度,這一特性與染色質(zhì)轉(zhuǎn)錄活躍程度相關(guān),從而能夠揭示基因調(diào)控的機(jī)制。ATAC-seq測(cè)序與分析,即利用轉(zhuǎn)座酶研究染色質(zhì)可接近性的高通量測(cè)序,可以檢測(cè)染色質(zhì)開(kāi)放區(qū)域,其原理是通過(guò)轉(zhuǎn)座酶Tn5容易結(jié)合在開(kāi)放染色質(zhì)區(qū)域的特性,對(duì)Tn5酶捕獲到的DNA序列進(jìn)行測(cè)序和富集分析。
ChIP-Seq測(cè)序與分析 是指通過(guò)染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)特異性地富集目的蛋白結(jié)合的DNA片段,并對(duì)其進(jìn)行純化和文庫(kù)構(gòu)建;然后對(duì)富集得到的DNA片段進(jìn)行高通量測(cè)序,通過(guò)將獲得的數(shù)百萬(wàn)條序列標(biāo)簽精確定位到基因組上,從而獲得全基因組范圍內(nèi)與組蛋白、轉(zhuǎn)錄因子等互作的 DNA 區(qū)段信息,是目前在全基因組水平研究蛋白結(jié)合靶DNA序列的重要手段,為轉(zhuǎn)錄因子、組蛋白修飾、核小體定位等表觀遺傳學(xué)的研究提供有效方法。
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